SYBR Green I 染料是一种直接与双链 DNA (dsDNA) 结合的荧光染料，是荧光定量PCR 最常用的DNA结合染料。在定量 PCR中，SYBR Green I可与双链DNA（dsDNA）非特异性结合后发出荧光，则可以通过检测反应体系中的SYBR Green I 荧光强度，达到检测PCR 产物扩增量的目的。游离状态下，SYBR  Green I发出微弱的荧光，一旦与dsDNA结合，其荧光增加1000倍，一个反应发出的全部荧光信号与出现的dsDNA量成比例，且会随扩增产物的增加而增加；所以通过检测PCR 反应液中的荧光信号强度，可以对目的基因进行准确定量，同时还可以测定扩增的目的DNA片段的熔解温度。

使用说明：

使用时，配置PCR反应混合液，将10000×SYBR Green I浓缩液加入到PCR反应体系，使终浓度为0.5× （0.2×到1×之间调整）。以上操作建议在冰上进行。

注：①  反应液配制方法和PCR 扩增条件请参照DNA聚合酶使用说明。

②  Realtime PCR 扩增仪的使用方法，请参照各仪器说明书。

注意事项：

使用浓度对荧光PCR结果的影响

SYBR Green I的使用浓度是保证荧光定量PCR实验成功非常关键的因素。如果SYBR Green I的浓度过低会使荧光信号的变化降低，这就意味着低拷贝的样品可能无法检出；而在高浓度时，将会抑制PCR反应，降低PCR反应效率。所以一般在使用SYBR Green I时应根据实际情况优化使用浓度，反应的终浓度为0.2×到1×之间。

镁离子浓度的影响

提高镁离子浓度可以降低SYBR Green I对PCR反应的抑制作用。我们建议在用SYBR Green I进行荧光PCR反应时，镁离子浓度比无SYBR Green I 的普通 PCR 反应高出0.5～3mM。