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高保真DNA聚合酶

英文名称:
Pfu DNA Polymerase
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Pfu DNA Polymerase 10kU 2640元 现货
Pfu DNA Polymerase 1000U 528元 现货
Pfu DNA Polymerase 500U 297元 现货
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产品简介:

         Pfu DNA Ploymerase是从克隆有Pyrococcus furiosis DNA Ploymerase基因的大肠杆菌中表达并经过柱纯化分离出来的重组蛋白,其分子量为90kD。由于Pfu酶具有3’→5’核酸外切酶活性,它能纠正DNA扩增过程中产生的错配,而传统的Taq酶却不能,其它耐热DNA Polymerase如Vent、Deep Vent、Tli、UITma等虽具有校正功能,但Pfu酶是目前已发现的所有耐热DNA Polymerase中出错率最低的。Pfu酶无5’→3’核酸外切酶活性,PCR反应中的延伸速度一般为0.5-1kb/min,比Taq酶要低。Pfu 酶比Taq酶热稳定性更好,95℃ 1小时仍保持90%以上的活性,对于GC含量很高的模板,变性温度可以提高到98℃而不影响其活性。Pfu酶的PCR产物为平末端,可加A处理再与T-载体连接或使用平末端克隆载体。

活性定义:

         1单位(U) Pfu DNA Polymerase活力定义为在74℃,30分钟内,以活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物,将10 nmol脱氧核苷酸掺入到酸不溶物质所需的酶量。

质量控制:

         SDS-PAGE检测Pfu DNA Polymerase纯度大于99%;经检测无外源核酸酶活性;PCR方法检测无宿主残余DNA;能有效地扩增人类基因组中的单拷贝基因;室温存放一周,无明显活性改变。

酶贮存缓冲液:

         50mM Tris-HCl (pH 8.2); 0.1 mM EDTA; 1 mM DTT; 50% glycerol;其他成份。

适用范围:

         用于DNA的高保真扩增,如基因表达克隆、基因定点突变、细胞内基因点突变的分析(SNP)和末端补平等。

注意事项:

1、PCR反应体系加样时,最后一步加入Pfu DNA Ploymerase,整个过程宜在冰上操作。

2、取Pfu DNA Ploymerase做PCR反应时,请用高压灭菌处理过的吸头。

3、10×Pfu Buffer中含20 mM Mg2+,如PCR反应需要较高Mg2+浓度,请另行加入。

4、 用Pfu酶扩增时,引物的纯度要求较高,引物长度大于18个碱基,Tm值在55-80℃之间,引物浓度在0.1-0.5uM之间,比Taq酶略高。

贮存:
-20℃保存, 有效期至少一年。
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