订购电话:4001650900

DNA病毒基因组提取试剂盒

英文名称:
分子式:
分子量:
别名:
产品订购:
品名 规格 包装 单价 货期
DNA病毒基因组提取试剂盒 50T 询价 现货
DNA病毒基因组提取试剂盒 100T 询价 现货
性状:
试剂盒内容:   50T     100T
蛋白酶K        1ml     1ml×2
结合液         25ml    50ml
漂洗液         15ml    15ml×2
洗脱液         10ml    20ml 
吸附柱         50个    100个
收集管         50个    100个
说明书         1份     1份
质量标准:
产品简介:

本试剂盒适合于从血清、细胞上清、淋巴液中提取DNA病毒基因组,不适合于RNA病毒基因组的提取。使用本试剂盒提取的基因组DNA可用于各种常规操作,包括酶切、PCR、文库构建、Southern杂交等实验。

操作步骤:

    使用前请先在漂洗液中加入无水乙醇,加入体积请参照瓶上的标签。所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。

1、  取病毒上清液0.5ml,12000rpm离心5min,尽量吸尽上清使用,弃去沉淀。

2、  向病毒上清中加入20ul的蛋白酶K(10mg/ml),充分混匀,65℃消化10-20min,期间可颠倒离心管混匀数次。

3、  向管中加入500ul结合液,充分混匀。再向管中加入400ul无水乙醇,充分混匀,此时可能会出现絮状沉淀,不影响DNA的提取,可将溶液和絮状沉淀都加入吸附柱中,静置2min。(吸附柱的最大容积为750ul,可分两次加入。一次吸附完离心后再将余下的混合液体加入柱中静置离心。)

4、  12000rpm离心2min,弃废液,将吸附柱放入收集管中。

5、  向吸附柱中加入600ul漂洗液(使用前请先检查是否已加入无水乙醇),12000rpm离心1min,弃废液,将吸附柱放入收集管中。

6、  向吸附柱中加入600ul漂洗液,12000rpm离心1min,弃废液,将吸附柱放入收集管中。

7、  12000rpm离心2min,将吸附柱置于室温或50℃温箱放置数分钟,目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除,     否则漂洗液中的乙醇会影响后续的实验如酶切、PCR等。

8、将吸附柱放入一个干净的离心管中,向吸附膜中央悬空滴加50ul-100ul经65℃水浴预热的洗脱液,室温放置5min,12000rpm离心1min。

9、离心所得洗脱液再加入吸附柱中,室温放置2min,12000rpm离心2min,即可得到高质量的病毒基因组DNA。

注意事项:

1、蛋白酶K需放置-20℃保存。

2、样品应避免反复冻融,否则会导致提取的DNA片段较小且提取量也下降。

3、若结合液中有沉淀,可在37℃水浴中重新溶解再使用,不影响效果。

4、洗脱缓冲液的体积最好不少于50ul,体积过小会影响回收效率。洗脱液的pH值对洗脱效率也有影响,若需要用水做洗脱液应保证其pH值在8.0左右(可用NaOH将水的pH值调至此范围),pH 值低于7.0会降低洗脱效率。DNA产物应保存在-20℃,以防DNA降解。

5、DNA浓度及纯度检测:得到的基因组DNA片段的大小与病毒的保存条件和种类等因素有关。D260值为1.0相当于大约50 ug/ml双链DNA、40 ug/ml单链DNA。OD260/OD280比值应为1.7-1.9,如果洗脱时不使用洗脱缓冲液,而使用去离子水,比值会偏低,因为pH值和离子存在会影响光吸收值,但并不表示纯度低。

6、如果病毒含量过低,最后提取的基因组DNA电泳可能无法检测到,但PCR等其他实验还会有结果。

贮存:
室温(15℃-25℃) 干燥保存,复检期12个月,2℃-8℃保存时间更长。
上海紫一试剂厂   © 2019 All Rights Reserved      许可证:沪ICP备19037119号    
网站地图:试剂CAS试剂分类试剂产品实验仪器耗材分类实验仪器耗材新闻资讯
   沪公网安备 31012002003055号