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RNA病毒基因组提取试剂盒

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品名 规格 包装 单价 货期
RNA病毒基因组提取试剂盒 50T 1155元 现货
RNA病毒基因组提取试剂盒 100T 1687.4元 现货
性状:
试剂盒组成 50 100
蛋白酶K 1ml 2ml
洗柱液 50ml 50ml×2
结合液 25ml 50ml
漂洗液 15ml 30ml
RNase free ddH2O 15ml 15ml×2
RNase free吸附柱 50个 100个
RNase free收集管(2ml) 50个 100个
质量标准:
产品简介:

本试剂盒适合于从血清、细胞上清、淋巴液中提取RNA病毒基因组,不适合于细胞等组织内RNA病毒基因组的提取。使用本试剂盒提取的基因组RNA可用于RT-PCR实验。

 

操作步骤:

使用前请先在漂洗液中加入一瓶新开启的无水乙醇,加入到离瓶口约0.5-1cm距离,盖好摇匀。所有离心步骤均在2-8℃条件下进行。

1、  取病毒上清液0.5ml,12000rpm离心5min,尽量吸尽上清使用,弃去沉淀(如无沉淀可省去此步)。

2、  向病毒上清中加入20ul 10mg/ml的蛋白酶K,充分混匀,65℃消化10min,期间可颠倒离心管混匀数次。

3、  吸附柱前处理:从包装中取出吸附柱,放入收集管中,加入700ul 洗柱液,室温放置2分钟,2-8℃ 12000 rpm离心2min,弃废液,将吸附柱放入收集管中待用。

4、  向病毒上清中加入500ul结合液,充分混匀。再向管中加入400ul无水乙醇,充分混匀,此时可能会出现絮状沉淀,不影响RNA的提取,可将溶液和絮状沉淀都加入吸附柱中,静置2min。(吸附柱的最大容积为750ul,可分两次加入。一次吸附完离心后再将余下的混合液体加入柱中静置离心。)

5、  12000rpm离心2min,弃废液,将吸附柱放入收集管中。

6、  向吸附柱中加入700ul漂洗液(使用前请先检查是否已加入无水乙醇),12000rpm离心1min,弃废液,将吸附柱放入收集管中。

7、  向吸附柱中加入500ul漂洗液,12000rpm离心1min,弃废液,将吸附柱放入收集管中。

8、  12000rpm离心2min,将吸附柱置于室温或50℃温箱放置数分钟,目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除,否则漂洗液中的乙醇会影响后续的实验如酶切、PCR等。

10、将吸附柱放入一个干净的离心管中,向吸附膜中央悬空滴加50ul-100ul经65℃水浴预热的RNase free ddH2O,室温放置5min,12000rpm离心2min。即可得到高质量的病毒基因组RNA。

注意事项:

1、经常更换新手套。因为皮肤经常带有细菌,可能导致RNase污染。使用无RNase的塑料制品和枪头避免交叉污染。

2、样品应避免反复冻融,否则会导致提取的RNA提取量也下降。

3、若结合液中有沉淀,可在37℃水浴中重新溶解。

4、如果样品消化不彻底,后面的离心步骤中可能会出现堵柱子的情况,可适当延长离心时间。

5、洗脱缓冲液的体积最好不少于50ul,体积过小会影响回收效率。

6、RNA产物应保存在-70℃,以防RNA降解。

7、RNA检测:得到的基因组RNA片段的大小与病毒的保存条件和种类等因素有关。由于病毒不含有核糖体RNA,所以常规电泳无法检测,只有后期实验才可检测到。D260值为1相当于大约40 μg/ml单链RNA。

贮存:
室温(15℃-25℃)干燥条件下可保存12个月,更长时间的保存可置于2℃-8℃。
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