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革兰氏阳性菌质粒大量提取试剂盒

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革兰氏阳性菌质粒大量提取试剂盒 10T 627元 现货
性状:
试剂盒组成 10T
RNase A 1ml
溶菌酶 10ml
溶液Ⅰ 60ml
溶液Ⅱ 60ml
溶液Ⅲ 80ml
漂洗液 15ml×2
洗脱液 30ml
吸附柱 10个
收集管 20个
说明书 1份
质量标准:
产品简介:本试剂盒先用溶菌酶处理,再用碱裂解法裂解细胞,通过吸附柱在高盐状态下特异性地结合溶液中的DNA的特性提取质粒DNA。吸附柱中采用的硅基质材料能高效、专一地吸附DNA,可最大限度去除杂质蛋白质及细胞中其他有机化合物。从50-100ml培养液中,可快速提取200-300μg纯净地高拷贝质粒DNA,提取率达85-90%。使用本试剂盒提取的质粒DNA可适用于各种常规的分子生物学试验,包括酶切、PCR、测序、连接和转化等试验。本试剂盒无需使用酚、氯仿等有毒试剂,操作安全。

注意事项:

1、溶液Ⅰ在使用前先加入RNaseA(将试剂盒中提供的RNaseA 全部加入),混匀,置于2-8℃保存。
2、第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明在漂洗液中加入无水乙  醇配制成工作液(向15ml的漂洗液中加入60ml的无水乙醇)。
3、使用前请先检查溶液Ⅱ和溶液Ⅲ是否出现混浊,如有混浊现象,可在 37℃水浴中加热几分钟,待溶液恢复澄清后再使用。

4、洗脱缓冲液体积不应少于500ul,体积过小影响回收效率;洗脱液的pH 值对洗脱效率也有影响,若需要用水做洗脱液应保证其 pH值在8.0左右( 可用NaOH 将水的pH值调至此范围) ,pH值低于7.0会降低洗脱效率。DNA产物应保存在-20 ℃,以防DNA降解。

5、如果所提质粒为低拷贝质粒或大于 10kb的大质粒,应加大菌体使用量,使用400-800ml过夜培养物,同时按照比例增加溶液Ⅰ、溶液Ⅱ和溶液Ⅲ的用量,吸附和洗脱时可以适当的延长时间,以增加提取效率。

6、DNA浓度及纯度检测:得到的质粒DNA纯度与样品保存时间、操作过程中的剪切力等因素有关。得到的DNA可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。DNA应在OD260处有显著吸收峰, OD260 值为1 相当于大约50 μg/ml 双链DNA、40 μg/ml 单链DNA。OD260/OD280比值应为1.7-1.9 ,如果洗脱时不使用洗脱缓冲液,而使用去离子水,比值会偏低,因为pH值和离子存在会影响光吸收值,但并不表示纯度低。


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