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真菌基因组DNA提取试剂盒

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真菌基因组DNA提取试剂盒 50T 询价 现货
真菌基因组DNA提取试剂盒 100T 询价 现货
性状:
试剂盒内容:50T 100T
RNase A 1ml 1ml×2
蛋白酶K 1ml 1ml×2
玻璃珠 6g 11g
溶液A 10ml 20ml
溶液B 10ml 20ml
漂洗液 15ml 15ml×2
洗脱液 10ml 20ml
吸附柱 50个 100个
收集管 50个 100个
说明书 1份 1份

质量标准:
产品简介:

    真菌是具有真核和细胞壁的异养生物,种属很多,已报道的属达1万以上,种超过10万个。真菌通常又分为三类,即酵母菌、霉菌和蕈菌(大型真菌)。对于酵母菌和霉菌,可以用玻璃珠处理,而对于大型真菌,可直接用液氮研磨。经过前期处理的菌液,用硅质膜吸附,即可得到高纯度的基因组。提取纯化后的DNA,可以直接用于 PCR/Real time-PCR,sequencing,Southern blot,mutant analysis,SNP 等下游应用实验。

操作步骤:

    使用前请先在漂洗液中加入无水乙醇,加入体积请参照瓶体上的标签。所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。

1、样品的处理:

       1)对于酵母菌,取1-2ml培养好的菌液,离心收集,弃上清。加入200ul 溶液A,加入20ul RNase A,再加入100mg玻璃珠,在高速振荡器上振荡,约5-10min。

       2)霉菌(孢子也可相同处理):取50-100mg菌丝,加200ul溶液A,用玻璃研磨器适当研磨分散菌丝,加入20ul RNase A,再加入100mg玻璃珠,在高速振荡器上振荡,约30min。

       3)大型真菌(如蘑菇等):称取50-100mg样品,倒入适量的液氮,立即研磨重复3 次,使样品研成粉末(如无液氮,可加200ul溶液A后用玻璃研磨器适当研磨),加200ul溶液A,加入20ul RNase A,再加入100mg玻璃珠,在高速振荡器上振荡,约5min。

2、 加入20ul的蛋白酶K(10mg/ml),充分混匀,55℃水浴消化30min,消化期间可颠倒离心管混匀数次。 12000rpm离心2min。将上清转移到一个新的离心管中。如有沉淀,可再次离心。

3、在上清中加入200ul溶液B,充分混匀。如出现白色沉淀,可放55℃水浴5min,沉淀即会消失,不影响后续实验。如溶液未变清亮,说明样品消化不彻底,可能导致提取的DNA量少及不纯,还有可能导致上柱后堵柱子,请增加消化时间。

4、再加入200ul无水乙醇,充分混匀,此时可能会出现絮状沉淀,不影响DNA的提取,将溶液和絮状沉淀都加入吸附柱中,放置2分钟。

5、12000rpm离心1min,弃废液,将吸附柱放入收集管中。

6、向吸附柱中加入600ul漂洗液(使用前请先检查是否已加入无水乙醇),12000rpm离心1min,弃废液,将吸附柱放入收集管中。

7、向吸附柱中加入600ul漂洗液,12000rpm离心1min,弃废液,将吸附柱放入收集管中。

8、12000rpm离心2min,将吸附柱置于室温或50℃温箱放置数分钟,目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除,否则漂洗液中的乙醇会影响后续的实验如酶切、PCR等。

9、将吸附柱放入一个干净的离心管中,向吸附膜中央悬空滴加50-200ul经65℃水浴预热的洗脱液,室温放置5min,12000rpm离心1min。

10、离心所得洗脱液再加入吸附柱中,室温放置2min,12000rpm离心2min,即可得到高质量的基因组DNA。

注意事项:

1. 由于真菌种类万千,对于一些特别难处理的真菌,可用液氮研磨,再用玻璃珠振荡,蛋白酶K处理,一般都可以得到一定量的基因组DNA,如电泳检测很弱,一般PCR都会有较好结果。

2. 若溶液A或溶液B中有沉淀,可在55℃水浴中重新溶解。

3. 如果DNA提取量很少,可加长玻璃珠处理时间,如果提取DNA成弥散短条带,可减少玻璃珠处理时间。

4. 洗脱缓冲液的体积最好不少于50ul,体积过小会影响回收效率;洗脱液的pH值对洗脱效率也有影响,若需要用水做洗脱液应保证其pH值在8.0左右(可用NaOH将水的pH值调至此范围),pH值低于7.0会降低洗脱效率;DNA产物应保存在-20℃,以防DNA降解。

5. DNA浓度及纯度检测:得到的基因组DNA片段的大小与样品保存时间、操作过程中的剪切力等因素有关。回收得到的DNA片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。DNA应在OD260处有显著吸收峰,OD260值为1相当于大约50 μg/ml双链DNA、40 μg/ml单链DNA。OD260/OD280比值应为1.7-1.9,如果洗脱时不使用洗脱缓冲液,而使用去离子水,比值会偏低,因为pH值和离子存在会影响光吸收值,但并不表示纯度低。

6. 在确保样品无误的情况下,如经过多次试验,都无法提出DNA,请将部分样品寄至我公司,我们代为摸索优化条件,以使您的实验能够正常进行下去。

贮存:
室温(15℃-25℃) 干燥保存,复检期12个月,2℃-8℃保存时间更长。
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